Record Details

PRODUCTION OF RECOMBINANT PROTEIN CRM197 IN ESCHERICHIA COLI

Medical Immunology

View Archive Info
 
 
Field Value
 
Title PRODUCTION OF RECOMBINANT PROTEIN CRM197 IN ESCHERICHIA COLI
ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО БЕЛКА CRM197 В КЛЕТКАХ E. COLI
 
Creator I. Dukhovlinov V.; 197110, Russian Federation, St. Petersburg, Pudozhskaya str., 7, Research Institute of Highly Pure Biopreparations.
E. Fedorova A.; 197110, Russian Federation, St. Petersburg, Pudozhskaya str., 7, Research Institute of Highly Pure Biopreparations.
E. Bogomolova G.; 197110, Russian Federation, St. Petersburg, Pudozhskaya str., 7, Research Institute of Highly Pure Biopreparations.
O. Dobrovolskaya A.; 197110, Russian Federation, St. Petersburg, Pudozhskaya str., 7, Research Institute of Highly Pure Biopreparations.
E. Chernyaeva N.; 197110, Russian Federation, St. Petersburg, Pudozhskaya str., 7, Research Institute of Highly Pure Biopreparations.
R. Al-Shekhadat I.; 197110, Russian Federation, St. Petersburg, Pudozhskaya str., 7, Research Institute of Highly Pure Biopreparations.
A. Simbirtsev S.
И. Духовлинов В.; 97110, Россия, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7, ФГУП ГосНИИ ОЧБ ФМБА России.
Е. Федорова А.; 97110, Россия, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7, ФГУП ГосНИИ ОЧБ ФМБА России.
Е. Богомолова Г.; 97110, Россия, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7, ФГУП ГосНИИ ОЧБ ФМБА России.
О. Добровольская А.; 97110, Россия, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7, ФГУП ГосНИИ ОЧБ ФМБА России.
Е. Черняева Н.; 97110, Россия, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7, ФГУП ГосНИИ ОЧБ ФМБА России.
Р. Аль-Шехадат И.; 97110, Россия, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7, ФГУП ГосНИИ ОЧБ ФМБА России.
А. Симбирцев С.; 97110, Россия, Санкт-Петербург, ул. Пудожская, 7, ФГУП ГосНИИ ОЧБ ФМБА России.
 
Subject recombinant protein;CRM197;adjuvant;conjugate vaccine;diphtheria toxin;Escherichia coli
рекомбинантный белок;CRM197;адъювант;конъюгированные вакцины;дифтерийный токсин;Escherichia coli
 
Description The CRM197 is a non-toxic mutant of diphtheria toxin having a single amino acid substitution of a glycine for a glutamic acid in position 52. Being naturally nontoxic, CRM197 is a promising adjuvant and ideal carrier protein for conjugate vaccines. Typically, production of diphtheria toxin and some of the non-toxic proteins are carried out by Corynebacterium diphtheriae. Production of recombinant protein CRM197 in Escherichia coli is advantageous. It is simple, cheap and permits production of the target protein in a short time using a non-pathogenic microorganism. In this study patented high-yield-producing E. coli strain was used. As a part of the study the following steps were taken: protocol adjustment for induction of crm197 gene, production and purification of recombinant CRM197 by ion-exchange, hydrophobic and gel-filtration chromatography. The purity of the final preparation reached 97%.
Белок CRM197 является нетоксичным производным дифтерийного токсина и характеризуется одной мутацией, а именно, заменой глицина на глутаминовую кислоту в положении 52. Белок CRM197 является перспективным адъювантом нового поколения, который может быть успешно использован в вакцинных и терапевтических препаратах. Классическим способом получения дифтерийного токсина и его нетоксичных производных является продукция в клетках Corynebacterium diphtheriae. Преимущество использования E. coli в качестве продуцента состоит в том, что данный метод является более простым и дешевым, и позволяет получать рекомбинантный CRM197 в короткие сроки с использованием непатогенного микроорганизма. В данной работе использовался запатентованный высокопродуктивный штамм-продуцент рекомбинантного CRM197 на основе клеток E. coli. В ходе исследования подобран оптимальный протокол индукции экспрессии гена crm197, разработан метод получения высокоочищенного препарата рекомбинантного CRM197 путем последовательного применения ионообменной, гидрофобной и молекулярноситовой типов хроматографии. 
 
Publisher Publishing house of Saint Petersburg Pasteur Institute
 
Contributor —
—
 
Date 2015-04-21
 
Type info:eu-repo/semantics/article
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
—
—
 
Format application/pdf
 
Identifier http://iimmun.ru/iimm/article/view/272
10.15789/2220-7619-2015-1-37-44
 
Source Russian Journal of Infection and Immunity; Том 5, № 1 (2015); 37-44
Инфекция и иммунитет; Том 5, № 1 (2015); 37-44
2313-7398
2220-7619
10.15789/2220-7619-2015-1
 
Language rus
 
Relation http://iimmun.ru/iimm/article/view/272/231
 
Rights Authors who publish with this journal agree to the following terms:Authors retain copyright and grant the journal right of first publication with the work simultaneously licensed under a Creative Commons Attribution License that allows others to share the work with an acknowledgement of the work's authorship and initial publication in this journal.Authors are able to enter into separate, additional contractual arrangements for the non-exclusive distribution of the journal's published version of the work (e.g., post it to an institutional repository or publish it in a book), with an acknowledgement of its initial publication in this journal.Authors are permitted and encouraged to post their work online (e.g., in institutional repositories or on their website) prior to and during the submission process, as it can lead to productive exchanges, as well as earlier and greater citation of published work (See The Effect of Open Access).
Авторы, публикующие в данном журнале, соглашаются со следующим:Авторы сохраняют за собой авторские права на работу и предоставляют журналу право первой публикации работы на условиях лицензии Creative Commons Attribution License, которая позволяет другим распространять данную работу с обязательным сохранением ссылок на авторов оригинальной работы и оригинальную публикацию в этом журнале.Авторы сохраняют право заключать отдельные контрактные договорённости, касающиеся не-эксклюзивного распространения версии работы в опубликованном здесь виде (например, размещение ее в институтском хранилище, публикацию в книге), со ссылкой на ее оригинальную публикацию в этом журнале.Авторы имеют право размещать их работу в сети Интернет (например в институтском хранилище или персональном сайте) до и во время процесса рассмотрения ее данным журналом, так как это может привести к продуктивному обсуждению и большему количеству ссылок на данную работу (См. The Effect of Open Access).